食用油被检测出黄曲霉毒素超标？实验告诉你，如何判断油能否食用

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黄曲霉毒素是由曲霉属中寄生曲霉和黄曲霉产生的次生有毒代谢产物，属于剧毒类小分子物质。

其中黄曲霉毒素B1毒性与危害最大，为1A类致癌物，研究表明痕量的黄曲霉素B1也会导致人体致癌、致畸及肝脏功能受损等，且热稳定性好，268℃以上的高温下才裂解。

当霉菌处于高温（25～32℃）、高湿（90%～110%）环境或处于与其他霉菌竞争的应激情况时，会产生霉菌毒素，且经常在粮食、油料及其制品中能检测到。

现阶段，世界各国均对其制定了相应的限量标准。因此，对粮食及油料作物中黄曲霉毒素的准确检测就显得十分关键。

样品前处理作为食用油中黄曲霉毒素B1分析方法的重要步骤，直接影响检测结果准确度与精密度。

目前，食用油中黄曲霉毒素B1前处理净化方法主要有免疫亲和柱法、固相萃取法等，其中免疫亲和柱因基质干扰少、可选择性吸附、特异性强、灵敏度高等特性得到广泛应用，国内外已有大量市售黄曲霉毒素免疫亲和柱。

但前处理过程均需要采用手动净化，过程繁琐、耗时过长的缺点。因此，采用自动净化的前处理方法具有重要意义。

免疫磁珠是一种新型磁性纳米粒子材料，近几年，免疫磁珠净化法基于灵敏度高、操作简单、耗时短、可批量处理样品、人员要求低等优点受到了广泛关注与研究，并逐渐应用于真菌毒素检测。

刘伟伟等利用化学共沉淀方法，制备超顺磁性纳米磁珠，通过与黄曲霉毒素B1多抗偶联得到免疫磁珠，结合高效液相色谱来共同检测植物油中黄曲霉毒素B1含量。

该方法线性良好，检出限为0.5μg/L，平均回收率为96%，相对标准偏差为12.5%。

李红洲等采用免疫磁珠净化法测定粮食中黄曲霉毒素B1，平均回收率在88.58%～107.61%，变异系数小于10%；上述免疫磁珠净化方法虽然能够满足黄曲霉毒素B1的分离与纯化，但是步骤仍较为复杂，因此，采用自动化、高通量的前处理方法具有重要意义。

实验材料与试剂有：黄曲霉毒素B1标准品；植物油中黄曲霉毒素B1分析检测质控样品；黄曲霉毒素B1免疫亲和柱；真菌毒素净化试剂盒——粮油中黄曲霉毒素净化试剂盒；甲醇、乙腈；玻璃纤维滤纸和双圈定量滤纸；植物油。

实验仪器与设备有：真菌毒素全自动净化仪；超纯水系统；涡旋振荡器；MNT-2800氮吹仪；超高效液相色谱仪配荧光检测器。

实验方法：准确称取5g油样品于50mL离心管中，加入20mL甲醇–水，涡旋混匀，摇床中震荡20min，以6000r/min离心5min，取上清液备用。

将经上述处理得到的上清液过定量滤纸，准确移取10mL滤液，加入20mL水混匀，过滤纸。将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温。

免疫亲和柱内的液体排干后，取10mL滤液至10mL注射器筒中，调节下滴速度，控制样液以1～2滴/秒的速度流出。

待样液滴完后，往注射器筒内加入20mL水，以2～3滴/秒流速淋洗免疫亲和柱。待水滴完后，用真空泵抽干亲和柱。用1mL甲醇洗脱，收集全部洗脱液至试管中。

在50℃下用氮气缓缓地将洗脱液吹至近干，用甲醇–水定容至1.0mL，涡旋30s溶解残留物，0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。

准确移取1mL上清液入试剂盒样品孔中，将试剂盒放入真菌毒素全自动净化仪，启动仪器，进入程序。

自动完成样品稀释、毒素富集、杂质清洗和目标物的洗脱流程。待程序完成后，在5孔位加入0.5mL纯水，混合后使用0.22μm滤膜过滤，收集滤液于进样瓶中以备进样。

其中黄曲霉毒素B1全自动净化仪净化程序：磁珠转移到样品孔，混合5min，磁吸7.5min；磁珠转移到清洗孔（2个），每个清洗孔清洗1min，磁吸1min；磁珠转移到洗脱孔，洗脱1min，磁吸1min后将磁珠转移到磁珠回收孔，净化结束。

单条试剂盒中黄曲霉毒素B1的自动净化时间为26min。

在0.625～10ng/mL范围内制备了一系列标准溶液建立标准曲线。以峰面积（Y）与标准溶液质量浓度（X）拟合线性（一阶）校正曲线；A=–7.047720e+004；b=13699236E+005，R2=0.9998，其具有良好的线性；确定方法的检出限（LOD）为0.02μg/kg，定量限（LOQ）为0.05μg/kg，完全能满足我国油脂及其制品中黄曲霉毒素B1的测定需求。

为对比两种方法的准确度，选用花生油基质中含有玉米黄曲霉毒素B1成分的国家有证标准物质，分别采用全自动免疫磁珠与免疫亲和柱净化法结合超高效液相色谱法对花生油中黄曲霉毒素B1进行检测，测定值在标准值及其扩展不确定度范围内，RSD不大于5%，检测结果较理想。

真菌毒素全自动净化仪与免疫亲和柱净化方式测定值分别是15.59µg/kg和14.64µg/kg，均在标准参考物质的标准值范围之内，说明两种净化方式的准确度都较高，可以满足检测要求。

为考察两种方法的准确度和精密度，对花生油、玉米油和大豆油阴性样品（未检出黄曲霉毒素B1的样品）分别添加3个不同水平的黄曲霉毒素B1进行加标回收率测定。

其中三种不同的油中全自动免疫磁珠净化法加标回收率在96.65%～109.06%之间；免疫亲和柱净化法加标回收率在88.48%～105.76%。

两种方法相对标准偏差（RSD）均在5%以内，满足日常检测需要。

分别采用全自动免疫磁珠和免疫亲和柱净化法对17个不同类型的植物油阳性样品（可检出黄曲霉毒素B1的样品）进行检测。采用配对t检验，评价两种净化方法测定结果的一致性。

通过t检验可知，t值（0.75）小于理论t0.05(17）值（2.11)，P>0.05，说明两种净化方法的测定结果无显著差异。

采用Bland-Altman法对全自动免疫磁珠与免疫亲和柱净化法进行差异分析，两种净化方法效果一致。两种方法只有5.9%(1/17）的点在95%一致性界限之外。

其中，在一致性界限范围以内，两种净化方法的测定值相比，差值的绝对值最大为2.34μg/kg，差值平均值为–0.57μg/kg。

这两种净化方法的差异在可接受范围内，因此可以认为这两种方法的净化效果具有较好的一致性，在净化和富集植物油中黄曲霉毒素B1时，可以互相代替使用，与李丽等、李红洲等研究结果一致。

免疫磁珠净化方法配套使用的真菌毒素全自动净化仪可一次处理10个样品，平均每个样品的净化时间约为2～3min，实现粮食中黄曲霉毒素B1的高通量自动净化。

免疫亲和柱手动净化，一人最多可同时处理10个样品，全过程需要近1h，平均每个样品的净化时间约为5～6min；由此可知，处理一个样品磁珠净化法能节约2～3min的时间，相较于免疫亲和柱手动净化，磁珠净化在净化时间上具有绝对优势。在处理大批量样品的时候，能够大大提高工作效率。